白介素6、程序性死亡因子配体在胃食管反流病中的作用

doi:10.3877/cma.j.issn.2095-8765.2020.03.002

中华胃食管反流病电子杂志 ›› 2020, Vol. 07 ›› Issue (03) : 144 -149. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-8765.2020.03.002

所属专题：文献；

论著

白介素6、程序性死亡因子配体在胃食管反流病中的作用

阿丽叶古丽·艾皮热¹, 买买提·依斯热依力¹, 叶勒丹·马汉², 克力木·阿不都热依木³^,^†(

)

^1. 830001　乌鲁木齐，新疆维吾尔自治区人民医院普外微创研究所；新疆维吾尔自治区人民医院临床医学研究中心
^2. 新疆维吾尔自治区人民医院临床医学研究中心
^3. 830001　乌鲁木齐，新疆维吾尔自治区人民医院普外微创研究所；新疆维吾尔自治区人民医院微创、疝和腹壁外科

收稿日期:2020-03-15 出版日期:2020-08-15
通信作者: 克力木·阿不都热依木
基金资助:
新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(2017D01C110)

The role of IL-6 and PD-L1 in occurrence of Gastroesophageal reflux disease

Aliyeguli·Aipire¹, Maimaiti·Yisireyili¹, Yeledan·Mahan², Kelimu·Abudureyimu³^,^†()

^1. Research Institute of Minimally Invasive Surgery People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region；Clinical Medical Research Center People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region
^2. Clinical Medical Research Center People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region
^3. Research Institute of Minimally Invasive Surgery People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region；Department of Minimally Invasive Surgery, Hernia and Abdominal Wall Surgery, People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumqi 830001, China

Received:2020-03-15 Published:2020-08-15
Corresponding author: Kelimu·Abudureyimu

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引用本文：

阿丽叶古丽·艾皮热, 买买提·依斯热依力, 叶勒丹·马汉, 克力木·阿不都热依木. 白介素6、程序性死亡因子配体在胃食管反流病中的作用[J]. 中华胃食管反流病电子杂志, 2020, 07(03): 144-149.

Aliyeguli·Aipire, Maimaiti·Yisireyili, Yeledan·Mahan, Kelimu·Abudureyimu. The role of IL-6 and PD-L1 in occurrence of Gastroesophageal reflux disease[J]. Chinese Journal of Gastroesophageal Reflux Disease(Electronic Edition), 2020, 07(03): 144-149.

目的

探讨白介素6（IL-6）、程序性死亡因子配体1（PD-L1）在胃食管反流病（GERD）发生中的作用。

方法

在体外培养大鼠的食管上皮细胞、CD4⁺T细胞，并建立正常大鼠食管上皮细胞和CD4⁺T细胞共培体系。实验组培养基依次加入鹅去氧胆酸、胰酶、盐酸溶液，使得培养基pH分别调节为4、5、6，培养12 h、24 h、48 h后分别收集下室细胞和上下室上清。对照组细胞正常培养，不予任何刺激处理。采用ELISA法、Western blot检测各细胞组中IL-6、PD-L1的表达水平。实验数据以

x ˉ

±s表示。总体比较采用重复测量方差分析，对于满足球形检验数据无需校正，如需校正采用Greenhouse-Geisser校正。

结果

随着pH浓度的增加、培养时间的延长，IL-6、PD-L1在各细胞中的表达量增高，其中IL-6、PD-L1在上皮细胞和CD4⁺细胞共培体系中的表达量最高（P＜0.05）。

结论

炎症细胞因子IL-6可能促进GERD中PD-L1的表达，在GERD的发生发展中发挥重要作用。

关键词: 胃食管反流病, 白介素6, 程序性死亡因子配体-1

Objective

To investigate the role of Interleukin-6 (IL-6) and Programmed Death Ligand 1 (PD-L1) in the pathogenesis of Gastroesophageal reflux disease (GERD).

Methods

In vitro, culture rat esophageal epithelial cells and CD4⁺T cells and establish a coculture system with normal rat esophageal epithelial cells and CD4⁺T cells. In the experimental group, chenodeoxycholic acid, pancreatin, and hydrochloric acid were added to the culture medium in order to adjust the pH of the medium to 4, 5, and 6, respectively; cells were cultured for 12 h, 24 h, and 48 h. The control group cells were cultured normally without any stimulation. ELISA and Western blot were used to detect the expression levels of IL-6 and PD-L1 in each group. The experimental data is expressed as

x ˉ

±s. The overall comparison uses repeated measures analysis of variance, and no correction is required to meet the sphericity test If correction is required, Green house-Geisser correction is used.

Results

With the increase of pH concentration and the extension of culture time, the expression levels of IL-6 and PD-L1 in each group were significantly increased (P＜0.05); expression levels of IL-6 and PD-L1 in epithelial cells and CD4⁺ cell co-culture system were reached the highest level (P＜0.05).

Conclusion

The inflammatory cytokine IL-6 may promote the expression of PD-L1 in GERD and play an important role in the occurrence and development of GERD.

Key words: Gastroesophageal reflux disease, Interleukin-6, programmed death ligand 1

图1 免疫荧光鉴定食管上皮细胞（400X）

图2 流式细胞仪的鉴定结果，A：CD4⁺FITC，B：阴性对照1，C：阴性对照2

表1 IL-6在不同处理条件的表达水平

分组		T=12	T=24	T=48
食管上皮细胞组	pH=4	27.23±0.07	36.00±0.04	41.28±0.45
	pH=5	19.15±0.05	32.41±0.21	38.18±0.01
	pH=6	12.29±0.29	16.26±0.26	19.43±0.23
	未处理		5.89±016
CD4⁺T细胞组	pH=4	62.95±0.95	126.74±0.25	131.22±0.22
	pH=5	54.18±1.18	113.93±0.43	125.0±0.07
	pH=6	40.02±1.02	97.62±0.62	107.4±0.45
	未处理		15.08±0.26
食管上皮细胞+ CD4⁺T细胞共培组	pH=4	66.35±0.35	136.11±0.11	137.00±0.18
	pH=5	59.53±0.53	127.02±0.32	132.43±0.99
	pH=6	46.57±0.27	108.93±0.47	120.00±0.20
	未处理		18.92±0.23

表1 IL-6在不同处理条件的表达水平

分组		T=12	T=24	T=48
食管上皮细胞组	pH=4	27.23±0.07	36.00±0.04	41.28±0.45
	pH=5	19.15±0.05	32.41±0.21	38.18±0.01
	pH=6	12.29±0.29	16.26±0.26	19.43±0.23
	未处理		5.89±016
CD4⁺T细胞组	pH=4	62.95±0.95	126.74±0.25	131.22±0.22
	pH=5	54.18±1.18	113.93±0.43	125.0±0.07
	pH=6	40.02±1.02	97.62±0.62	107.4±0.45
	未处理		15.08±0.26
食管上皮细胞+ CD4⁺T细胞共培组	pH=4	66.35±0.35	136.11±0.11	137.00±0.18
	pH=5	59.53±0.53	127.02±0.32	132.43±0.99
	pH=6	46.57±0.27	108.93±0.47	120.00±0.20
	未处理		18.92±0.23

表2 IL-6重复测量方差分析结果

变异来源	SS	df	MS	F	P
时间	42646.42	2	21323.21	148260.24	＜0.05
时间*pH	141.88	4	35.47	246.62	＜0.05
时间*组	12643.38	4	3160.84	21977.34	＜0.05
时间pH组	112.67	8	14.08	97.93	＜0.05
重复测量误差	5.18	36	0.14

表2 IL-6重复测量方差分析结果

变异来源	SS	df	MS	F	P
时间	42646.42	2	21323.21	148260.24	＜0.05
时间*pH	141.88	4	35.47	246.62	＜0.05
时间*组	12643.38	4	3160.84	21977.34	＜0.05
时间pH组	112.67	8	14.08	97.93	＜0.05
重复测量误差	5.18	36	0.14

图3 PD-L1在A、B及C组细胞处理前后的表达水平

表3 PD-L1在不同处理条件的表达水平

分组		T=12	T=24	T=48
食管上皮细胞组	pH=4	0.237±0.006	0.289±0.010	0.358±0.010
	pH=5	0.132±0.007	0.171±0.010	0.410±0.010
	pH=6	0.092±0.001	0.136±0.001	0.255±0.001
	未处理		0.093±0.003
CD4⁺T细胞组	pH=4	0.223±0.001	0.311±0.009	0.387±0.002
	pH=5	0.139±0.001	0.152±0.001	0.386±0.002
	pH=6	0.093±0.006	0.130±0.001	0.234±0.001
	未处理		0.099±0.002
食管上皮细胞+CD4⁺T细胞共培组	pH=4	0.289±0.001	0.472±0.001	0.601±0.001
	pH=5	0.187±0.059	0.321±0.020	0.600±0.001
	pH=6	0.162±0.001	0.275±0.003	0.423±0.002
	未处理		0.259±0.002

表3 PD-L1在不同处理条件的表达水平

分组		T=12	T=24	T=48
食管上皮细胞组	pH=4	0.237±0.006	0.289±0.010	0.358±0.010
	pH=5	0.132±0.007	0.171±0.010	0.410±0.010
	pH=6	0.092±0.001	0.136±0.001	0.255±0.001
	未处理		0.093±0.003
CD4⁺T细胞组	pH=4	0.223±0.001	0.311±0.009	0.387±0.002
	pH=5	0.139±0.001	0.152±0.001	0.386±0.002
	pH=6	0.093±0.006	0.130±0.001	0.234±0.001
	未处理		0.099±0.002
食管上皮细胞+CD4⁺T细胞共培组	pH=4	0.289±0.001	0.472±0.001	0.601±0.001
	pH=5	0.187±0.059	0.321±0.020	0.600±0.001
	pH=6	0.162±0.001	0.275±0.003	0.423±0.002
	未处理		0.259±0.002

表4 PD-L1重复测量方差分析结果

变异来源		SS	V	MS	F	P
时间	Greenhouse-Geisser	0.762	1.197	0.636	1991.824	0.000
时间*pH	Greenhouse-Geisser	0.075	2.395	0.031	98.098	0.000
时间*组	Greenhouse-Geisser	0.064	2.395	0.027	84.249	0.000
时间pH组	Greenhouse-Geisser	0.005	4.790	0.001	3.181	0.028
误差(时间)	Greenhouse-Geisser	0.007	21.554	0.000

表4 PD-L1重复测量方差分析结果

变异来源		SS	V	MS	F	P
时间	Greenhouse-Geisser	0.762	1.197	0.636	1991.824	0.000
时间*pH	Greenhouse-Geisser	0.075	2.395	0.031	98.098	0.000
时间*组	Greenhouse-Geisser	0.064	2.395	0.027	84.249	0.000
时间pH组	Greenhouse-Geisser	0.005	4.790	0.001	3.181	0.028
误差(时间)	Greenhouse-Geisser	0.007	21.554	0.000

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